Elektroforeza: kaj je, čemu služi in kako se izvaja

Elektroforeza je laboratorijska tehnika, ki se izvaja z namenom ločevanja molekul glede na njihovo velikost in električni naboj, tako da je mogoče postaviti diagnozo bolezni, preveriti ekspresijo beljakovin ali prepoznati mikroorganizme.

Elektroforeza je preprost in poceni postopek, ki se uporablja v laboratorijskih rutinah in raziskovalnih projektih. Glede na namen elektroforeze bo morda treba opraviti še druge teste in preglede, da se na primer postavi diagnoza.

Za kaj gre

Elektroforeza se lahko izvede za več namenov, tako v raziskovalnih projektih kot pri diagnozi, saj gre za preprosto in poceni tehniko. Tako se elektroforeza lahko izvede za:

• Identificirajte viruse, glive, bakterije in parazite, najpogostejša je ta aplikacija v raziskovalnih projektih; test očetovstva; preverite izražanje beljakovin; prepoznajte mutacije, na primer pri diagnozi levkemije; analizirajte vrste krožečega hemoglobina, koristno pri diagnozi srpastecelične anemije; Ocenite količino beljakovin v krvi.

Glede na namen elektroforeze bo morda treba opraviti še druge dopolnilne teste, da bo zdravnik dokončno postavil diagnozo.

Kako se to počne

Za elektroforezo je potreben gel, ki je lahko iz poliakrilamida ali agaroze, odvisno od cilja, pufer za elektroforezo in kad, molekul za molekulsko maso in fluorescentno barvilo, poleg opreme za UV ali LED svetlobo, imenovane tudi transilluminator.

Po pripravi gela je treba postaviti določen predmet, tako da so v gelu narejeni vdolbinice, ki jih popularno imenujemo glavnik, in pustimo, da se gel usede. Ko je gel pripravljen, samo nanesite snovi v vdolbinice. Za to je treba v eno vdolbinico postaviti marker molekulske mase, pozitivno kontrolo, to je snov, za katero je znano, kaj je, negativno kontrolo, ki zagotavlja veljavnost reakcije, in vzorce, ki jih je treba analizirati. Vse vzorce je treba mešati s fluorescentnim barvilom, saj je na ta način mogoče vizualno prikazati trakove na transilluminatorju.

Gel z vzorci je treba postaviti v kad za elektroforezo, ki vsebuje specifično pufersko raztopino, nato pa se naprava vklopi, da pride do električnega toka in posledično do potencialne razlike, kar je pomembno za ločitev delcev glede na njihovo obremenitev in velikost. Elektroforetski čas teka se razlikuje glede na namen postopka in lahko traja do 1 ure.

Po določenem času je mogoče videti rezultat elektroforetskega teka skozi transilluminator. Ko je gel postavljen pod UV ali LED svetlobo, je mogoče vizualizirati vzorec vezanja: večja je molekula, manjša je njena migracija, bližje se vdolbinici, medtem ko je močnejša molekula, večji je migracijski potencial.

Da bi bila reakcija potrjena, je treba pasove pozitivne kontrole vizualizirati in v negativnem nadzoru ne sme biti nič vidno, saj v nasprotnem primeru to pomeni, da je prišlo do kontaminacije, celoten postopek pa je treba ponoviti.

Vrste elektroforeze

Elektroforeza se lahko izvaja v različne namene in glede na njen namen je mogoče uporabiti več vrst gela, najpogostejša sta poliakrilamid in agaroza.

Elektroforeza za identifikacijo mikroorganizmov se pogosteje izvaja v raziskovalnih laboratorijih, vendar se lahko v diagnostične namene elektroforeza uporablja za prepoznavanje hematoloških bolezni in bolezni, ki se razvijajo s povečanjem količine beljakovin, ki so glavne vrste elektroforeze:

1. Elektroforeza hemoglobina

Elektroforeza hemoglobina je laboratorijska tehnika, ki se izvaja za prepoznavanje različnih vrst hemoglobina, ki kroži v krvi, kar omogoča ugotavljanje prisotnosti bolezni, povezanih s sintezo hemoglobina. Vrsta hemoglobina se identificira z elektroforezo pri točno določenem pH, idealno med 8, 0 in 9, 0, pri čemer se preveri vzorec pasov, ki ga je mogoče primerjati z običajnim vzorcem, kar omogoča identifikacijo prisotnosti nenormalnih hemoglobinov.

Kaj se naredi za: Elektroforeza hemoglobina se naredi za raziskovanje in diagnosticiranje bolezni, povezanih s sintezo hemoglobina, kot sta srpastecelična anemija in bolezen hemoglobina C, poleg tega, da je koristna pri razlikovanju talasemije. Naučite se, kako razlagati elektroforezo hemoglobina.

2. Proteina elektroforeza

Proteinska elektroforeza je izpit, ki ga zahteva zdravnik, da oceni količino beljakovin, ki krožijo v krvi, in tako ugotovi bolezni. Ta test se opravi iz vzorca krvi, ki ga centrifugiramo, da dobimo plazmo, del krvi, ki je med drugimi snovmi sestavljen iz beljakovin.

Po elektroforezi je mogoče vizualizirati vzorec pasov in posledično graf, v katerem je navedena količina vsake frakcije beljakovin, ki je temeljna za diagnozo.

Kaj se naredi za: Elektroforeza z beljakovinami omogoča zdravniku, da razišče pojavnost multiplaga mieloma, dehidracije, ciroze, vnetja, bolezni jeter, pankreatitisa, lupusa in hipertenzije v skladu z vzorcem pasu in grafom, predstavljenim v poročilu o pregledu..

Razumeti, kako se to počne in kako razumeti rezultat elektroforeze proteinov.