Molekularna diagnoza ustreza množici molekulskih tehnik, katerih namen je prepoznati spremembe v DNK, ki bi lahko na primer kazale na genetske bolezni ali raka. Poleg tega se molekularne tehnike široko uporabljajo za prepoznavanje in potrditev nalezljivih bolezni, saj predstavljajo hitrejšo in natančnejšo diagnostično metodo.
Molekularna diagnoza je draga, zato je zdravniki ne zahtevajo zelo pogosto, kljub temu pa daje natančne rezultate glede prisotnosti spremembe, načina, kako lahko moti delovanje organizma in bolnikov odziv na zdravljenje.
Za kaj gre
Molekularno diagnozo lahko izvedemo z več cilji, med katerimi so glavni:
- Identifikacija mutacij, povezanih z levkemijo, na primer identifikacija translokacije BCR-ABL, ki je značilna za kronično mieloidno levkemijo (CML); Značilne mutacije hematoloških bolezni, kot so dedna hemokromatoza, policitemija vera, esencialna trombocitemija in trombofilija, na primer Molekularne spremembe, ki kažejo na pojav raka, kot je na primer kolorektalni, pljučni, dojk in možganski rak; Diagnoza nalezljivih bolezni, kot so hepatitis, uretritis, toksoplazmoza, lejmanijaza itd., Poleg identifikacije virusa HPV.
Molekularna diagnoza je, čeprav se v primerjavi z drugimi diagnostičnimi tehnikami zdi draga, natančnejša, saj lahko sporoči spremembe, povezane z določeno boleznijo, in stopnjo vpliva te spremembe v telesu ter tako pomaga pri zdravljenju osebe.
Poleg tega, da se uporabljajo za diagnostiko različnih bolezni, se za oceno odziva na zdravljenje, zlasti pri ljudeh z rakom, uporabljajo tudi molekularne tehnike, ki so ena izmed najučinkovitejših metod za označevanje napredovanja in ponovitve bolezni.
Kako se to počne
Molekularna diagnoza se lahko opravi s katerim koli vzorcem, ki ga na zahtevo zdravnika zahteva tisti, ki najbolje poda podatke o bolnikovem stanju, to so lahko urin, slina ali v večini primerov kri. Za postni izpit ni treba posteti ali kako drugače pripravljati.
Vzorec se odvzame in pošlje v laboratorij skupaj z navodili zdravnika, ki sporočajo izpit ali vrsto raziskav, ki jih je treba opraviti. Izvedena molekularna tehnika je odvisna od zahtevanega pregleda in vključuje vrsto natančnih postopkov, katerih namen je ugotoviti prisotnost ali odsotnost spremembe, ki jo je zahteval zdravnik.
Običajno se uporabi le majhna količina poslanega vzorca, ostalo pa se shrani tako, da se po potrebi izpit ponovi.
Poglejte, katere so glavne molekularne tehnike
PCR
PCR, kratek za verižno reakcijo polimeraze ali polimerazno verižno reakcijo , je molekularna tehnika, ki sestoji iz amplificiranja drobca genetskega materiala bodisi DNK bodisi RNK z namenom prepoznavanja mutacij in s tem pomoči pri diagnozi bolezni.
Ta tehnika je narejena iz ekstrakcije in čiščenja genskega materiala, ki ga nato damo v mešanico, v kateri je ena od komponent restrikcijski encim, ki se spreminja glede na zahtevani test in katerega naloga je razrez materiala na drobce tako da je mogoče ugotoviti možno gensko spremembo. Mešanico damo v termocikler, ki je naprava, ki deluje zaradi temperaturnih nihanj, ki jih strokovnjak glede na izpit navaja in s tem omogoča ojačanje genetskega fragmenta. Pri običajnem PCR-ju se po amplifikaciji produkt PCR podvrže elektroforezi, ki je molekularna tehnika, ki temelji na teži in velikosti drobcev, torej se glede na te značilnosti ustvari pasni vzorec, katerega analiza je narejena temelji na pasu pozitivne kontrole, to je pasu, za katerega je znano, da ustreza genetski spremembi.
PCR v realnem času, imenovan tudi qPCR, je vrsta kvantitativnega PCR, to je, da poleg identifikacije genske spremembe lahko zagotovi informacije o ekspresiji genov, torej o tem, koliko spremenjenega gena se izrazi v organizmu., zato se lahko uporablja za pomoč pri diagnozi in spremljanju zdravljenja. PCR v realnem času ne zahteva elektroforeze, celoten postopek amplifikacije in analize genetskega materiala opravi naprava, rezultat pa razlaga usposobljeni zdravstveni delavec.
Zaporedje
Sekvenciranje je molekularna tehnika, ki sestoji iz določanja zaporedja nukleotidov DNK, ki so tvorilne enote genskega materiala. Sekvenciranje nastane iz reakcije, podobne PCR, vendar se v amplifikacijski mešanici dodajo spremenjeni nukleotidi z dodatkom fluorohromov, ki kot material amplificirajo spremenjene nukleotide vgradijo v DNK in ustvarijo več fragmentov, ki ustrezajo zaporednemu izdelku.
Produkt reakcije damo v napravo, imenovano sekvence DNA, v kateri se, ko fragmente dosežemo z laserjem opreme, fluokrokromi vzbudijo, ki oddajajo fluorescenco, kar oprema označuje s konicami, pri čemer vsak vrh ustreza do nukleotida. Na koncu reakcije bo oprema obvestila zaporedje DNK in tako zdravniku pomagala pri diagnozi genetskih bolezni.
